Bioss讲堂｜IHC之石蜡包埋实操注意要点详解

本期导读：IHC（Immunohistochemistry, 免疫组织化学）是用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分布进行组织和细胞原位检测的技术。IHC实验中保护组织的两种主要方法是对组织进行石蜡包埋和冰冻，其中石蜡包埋是制作组织标本最常用、最基本的方法。

石蜡包埋对于组织形态保存完好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究。实验组织保护的质量是保证病理报告准确性的重要环节。

本期将介绍石蜡包埋过程中容易忽略，但对实验结果影响很大的实操注意点。

常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤：固定，脱水，透明，浸蜡和包埋。

1、固定

取新鲜组织浸泡在4%Paraformaldehyde或10%Formalin溶液中固定24-48h。固定完后自来水冲洗五次，各30min。

组织经过50%、70%、85%、95%的梯度酒精各30min，无水乙醇两次，每次30min完成脱水。

Tips：
​​​​① 未经充分固定的组织不得进去脱水步骤。固定、脱水温度不得超过37℃。
② 用于脱水的试剂容积应为组织总体积的5-10倍以上。
③ 由低向高浓度酒精脱水，级差越小越好。
④ 量大或条件允许，可将大小组织分开脱水，较大组织块脱水时间长与较小者。
⑤ 组织至于无水乙醇内的时间不宜过长，以免硬化。

3、透明

分别经过无水乙醇：dimethylbenzene、dimethylbenzene（Ⅰ）（根据组织透明度，可减少或增加第二遍dimethylbenzene透明的时间）、dimethylbenzene（Ⅱ）各30min。

Tips：
① dimethylbenzene的容积应为组织总体积的5-10倍以上。
② 透明度时间适宜，依不同种类组织及其大小而异（子宫肌瘤、食管等坚硬组织延长；肝脏，小组织缩短）组织呈现棕黄或暗红色透明即可。
③ dimethylbenzene应及时过滤、更换。

4、浸蜡

蜡Ⅰ，蜡Ⅱ各30min.

Tips：
石蜡温度控制在58-62℃，高于熔点2℃为佳。

将金属托放入熔化的石蜡，再放入组织，冷固待石蜡凝固。

Tips：
① 防止各种异物组织包入蜡块内。
② 包埋应先放石蜡后放组织，速度尽可能快，以免凝固。
③ 包埋用熔蜡应纯净，熔点与浸蜡的相近。
④ 包埋时不得使用明火，以防点燃，镊子不可温度过高，以免烫伤组织。
⑤ 包一个换一把镊子，防止污染。
⑥ 囊壁、管腔竖直包埋，所需切面向下包埋；扭曲组织正后包埋；多个小组织可以包在一个面。

 

《IHC/IF/ICC实验方案流程图及所需试剂》