Bioss讲堂｜HE染色疑难解答

本期导读：HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。一张质量上乘的HE切片是病理医生得以做出正确诊断的关键。影响HE染色质量的因素是多方面的。本文主要对HE染色中常见的几个问题及其对策进行分析讨论。

Hematoxylin-eosin staining，简称HE染色法 ，石蜡切片技术里常用的染色法之一 。Hematoxylin染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。

HE染色过程：

❶将已入蒸馏水后的切片放入Hematoxylin水溶液中染色数分钟。

❷酸水及NH₃·H₂O中分色，各数秒钟。

❸流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。

❹入70％和90％酒精中脱水各10分钟。

❺入酒精伊红染色液染色2—3分钟。

❻染色后的切片经纯酒精脱水，再经dimethylbenzene使切片透明。

❼将已透明的切片滴上加拿大树胶，盖上盖玻片封固。

HE染色常见的问题及解决方法

问题1  切片呈雾状/发灰/发白，核染色模糊

原因：①待封还潮；②苏木素过氧化老化，乙酸挥发；③脱水，透明剂不良，杂质过多；

解决方法：①空气除湿；②苏木素过滤后加入乙酸（促染剂）；③常规更换酒精，dimethylbenzene。

问题2  染色不均

原因：①固定不充分；②高浓度酒精脱水时间过长；③浸蜡不佳；④染色时间掌握不好；

解决方法：①定期更换染色液；②用2%铁明矾处理；③浸蜡温度高于熔点2℃左右；④苏木素染色镜下控制。
 

问题3  细胞成分蓝色，如粘液，胶原蛋白或平滑肌

原因：①苏木素溶液过染；②分化不充分；③苏木素溶液的PH值＞3；

解决方法：①缩短染色时间；②用1%盐酸酒精分化2-5s，洗脱过染胞核，不应着色的组织成分；③用乙酸调节苏木素PH值为2.5；④提高酸性酒精的浓度。
 

问题5  胞质染色太深

原因：①切片在伊红溶液中时间过长；②伊红染色后分化不足；③伊红染液可能过浓；

解决方法：①减少伊红溶液染色时间，稀释伊红染液；②85%酒精增加分化时间。
 

问题6  胞质染色太淡

原因：①伊红染液使用时间太久；②伊红染液的PH值＞4.5，乙醇脱水易褪色；③伊红染液后酒精冲洗不正确；④伊红染色时间太短；

解决方法：①更换新鲜的伊红染液；②用浓醋酸调节伊红染液PH值（4~4.5），伊红PH值＜3.6，核发紫，对比不强；伊红染液PH值＞5，染不上；③减少伊红步骤后酒精冲洗的时间；④增加伊红溶液的染色时间。
 

问题7  细胞核发红棕色

原因：①苏木素染色液氧化过度；②返蓝不足；

解决方法：①及时更换然染液；②返蓝可用流水、温水或稀NH₃[aq]、0.2%碳酸氢钠等。

举栗

Ⅰ 正常染色（细胞核呈蓝色，细胞浆呈玫红色，颜色分明）（肾）

Ⅱ 细胞成分蓝色（胎盘）

Ⅲ 切片呈雾状/发灰/发白，核染色模糊（胎盘）

Ⅳ 胞质染色太深（肝）

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