为什么很多研究人员更喜欢用多克隆抗体进行IHC/IF实验?

1845 人阅读发布时间：2020-02-26 13:46

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单克隆抗体和多克隆抗体都广泛应用于IHC/IF检测。然而，与多克隆抗体相比，某个单克隆抗体的使用效果，在不同的样品中可能存在显著的差异。揭示这种表象背后的原因，将是一件很有趣的事情。

我们都知道，在IHC/IF样品制备的过程中，生物样本的抗原性将面临巨大的挑战，尤其是石蜡包埋样品。化学试剂以及不良的物理条件可以很容易地破坏或阻断目标蛋白(抗原)中的某些抗原表位。一旦某个特定的抗原决定簇在IHC/IF样品制备过程中被破坏，其专一性的单克隆抗体将失去检测到这个抗原的机会，从而造成假阴性的结果。相比之下，多克隆抗体能够在同一抗原上识别多个表位，即使在某一表位特性丧失的情况下，目标蛋白上的其它抗原表位仍然可能被抗体识别，从而表现出完美的实验结果。此外,高质量的多克隆抗体由多种抗体分子组成，它们分别识别抗原上的一系列抗原表位。当进行IHC/IF检测时，每个抗原分子可以结合多个不同的抗体分子，在检测结果中显示出很强的信号，从而极大的提高抗原检测的灵敏度。

此外，自然界中的许多蛋白质，由于表达过程中存在的剪切差异，有不同的变形体存在。如果某个蛋白表位并不是均一性的存在于所有变形体中，其特异性单克隆抗体就无法识别所有的蛋白变形体。这一限制将直接影响对于该蛋白质家族的功能及作用的整体研究。显而易见，多克隆抗体具有识别多个抗原表位的特性，在IHC/IF试验中，受到这种限制的影响较小，其抗原检测的表现就会更好，体现出优良的抗原检测灵敏度。

综上所述，鉴于多克隆抗体整体上具有较高的抗原识别灵敏度，经验丰富的科学家们在IHC/IF检测中更喜欢使用多克隆抗体，而非单克隆抗体。

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Bioss提供经过验证的多克隆抗体，以支持科学研究，其中许多产品已在科学杂志上报道。

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尽管有前面的讨论，许多优质的单克隆抗体在IHC/IF应用中依然有良好的表现。因此，当你在决定使用单克隆抗体还是多克隆抗体时，必须考虑具体的实验条件和目的。下面我们就来总结一下每种抗体的优缺点。

多克隆抗体	单克隆抗体
优点
抗原检测的高敏感性，由于抗体结合多个表位，即使在低表达水平下也能帮助放大来自目标蛋白的信号。	单一表位的高度特异性，降低交叉反应的风险。
对变性或构象改变的蛋白质有良好的检测性能	定量蛋白质含量时，结果会更好
高度稳定及宽泛的pH值或缓冲变化	批次间稳定
缺点
批次间不稳定	用于检测变性状态或构象改变的蛋白质的性能较差
如果免疫原的设计和选择不严格，交叉反应的可能性更大	不太适合需要快速捕获目标蛋白的应用
	对pH值和缓冲条件更敏感