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2832 人阅读发布时间:2021-01-18 10:13


免疫印迹技术 (Western blotting, WB) 是蛋白定性和定量的金标准,因此广泛应用于生物学研究。由于Western blot检测包含多个步骤,样品制备、上样或转膜等实验过程中任何细微的差异,都可能导致实验结论的不一致性,甚至完全相悖。为了避免实验操作差异引起误差,在任何WB检测实验中,都需要设定合适的内参。
选择内参应遵循以下原则
稳定表达:在特定实验条件下(如特殊的实验处理或不同的发育阶段),内参蛋白的水平相对于总蛋白保持恒定;
分子量大小:内参蛋白分子量与目的蛋白分子量明显不同,最好能相差 5kd 以上;
表达水平:内参蛋白应在实验样本中高表达;
丰度相似性:实验样本中内参蛋白的表达丰度应与目的蛋白的丰度有相似性,实验方案和检测方法可以揭示内参蛋白和目标蛋白水平的变化,而不会出现信号饱和;(如果内参蛋白的表达水平远远高于目的蛋白,必须对内参蛋白进行梯度稀释以确定内参蛋白的检测范围)。