Bioss周周荐 | BCA 蛋白定量试剂盒

工作原理

蛋白质定量是蛋白质研究的基础工作之一。BCA (bicinchoninic acid)是理想的蛋白质定量方法，是当前比Lowry法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。

BCA Protein Assay Kit‌是一种用于蛋白质浓度测定的试剂盒，它基于BCA（Bicinchoninic Acid）法进行蛋白质定量分析。蛋白质在碱性条件下，将 Cu 2+还原为 Cu +，Cu +与 BCA 试剂形成紫颜色的络合物，该复合物的颜色深浅与蛋白质浓度成正比，从而可以通过测量其在562nm处的吸光度来确定蛋白质的浓度。该方法快速灵敏、稳定可靠，不受绝大部分样品中的化学物质的影响，对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小。BCA 蛋白定量试剂盒(BCA Protein Assay Kit)实现了蛋白浓度测定简单、稳定性高、灵敏度高和兼容性高的特点。

产品介绍

产品优势

准确灵敏，线性范围广：BCA 试剂的蛋白质测定范围是 10-2000μg/mL。

快速：45 分钟内完成测定，比经典的 Lowry 法快 4 倍而且更加方便。

经济实用：在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。

效果稳定：不受样品中离子型和非离子型去污剂影响，检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝。

使用说明

1. 配制工作液: 根据标准品和样品数量，按体积比A : B (50：1)配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。
2. 稀释标准品：取10微升标准品用PBS稀释至100ul（标准品一般可用PBS稀释），使终浓度为0.5mg/ml。将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20ul加到96孔板的蛋白标准品孔中，加PBS补足到20ul。
3. 加适当体积样品到96孔板的样品孔中，补加PBS到20ul。
4. 各孔加入200ul BCA工作液，37℃放置30分钟。
5. 冷却到室温，用酶标仪562nm测定OD值，根据标准曲线计算出蛋白浓度。

注意事项

1. 在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或37℃温育使溶解, 如发现细菌污染则应丢弃。
2. 样品中若含有EDTA、EGTA、DTT、硫酸铵、脂类会影响检测结果，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒；高浓度的去垢剂也影响实验结果，可用TCA沉淀去除干扰物质。
3. 要得到更为精确的蛋白浓度结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔, 每次均应做标准曲线。
4. 当试剂A和B混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失，工作液在密闭情况下可保存1周。
5. 需准备37℃水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。酶标仪需与96孔酶标板配套使用。使用分光光度计测定蛋白浓度时，试剂盒测定的样品数量会因此而减少。使用温箱孵育时，应注意防止因水粉蒸发影响检测结果。

文献引用精选

​